تبلیغات
آزمایشگاه میکروب I - جلسه چهارم (تهیه محیط کشت)
جمعه 1 آذر 1387

جلسه چهارم (تهیه محیط کشت)

   نوشته شده توسط: علی ملکی    

محیط کشت  یک محیط مغذی و مناسب است که برای رشد و حفاظت باکتری مورد استفاده قرار می گیرد. محیط کشت باید از مواد ساده و قابل تجزیه تشکیل شده باشد که برای باکتری قابل استفاده و جذب باشد. در محیط کشت یک سری مواد ضروری و یک سری هم منابع انرژی می باشد.

 

انواع محیط کشت از نظر فیزیکی

 

الف) محیط های مایع Broth media

مهم ترین مشخصه این محیط ها این است که فاقد آگار هستند و کاملاً آبکی و داخل لوله آزمایش تهیه می شوند. زمانی که می خواهیم تعداد زیادی از یک میکروب تکثیر کنیم و برای انجام آزمایشات بیوشیمیایی از محیط کشت مایع استفاده می کنیم.

مشکل این محیط این است که اگر چند نمونه میکروب داشته باشیم تشخیص شان از هم مشکل می شود.

برای بررسی رشد میکروب ها از خواصی مثل تغییر رنگ، کدورت، تغییرات خواص فیزیکی و شیمیایی در مقابل نور و دستگاه استفاده می شود.

 

ب) محیط های جامد

مهم ترین مشخصه این محیط ها این است که دارای آگار هستند. آگار کربوهیدراتی است که از نوعی جلبک قرمز دریایی بدست می آید، در واقع پلی ساکاریدی از واحدهای ساکارز ______

مشخصه آگار: معمولاً مورد استفاده باکتری قرار نمی گیرد. در حرارت های رشد مناسب باکتری ذوب نمی شود، بلکه دمای ذوبش حدود 100 درجه است و در دمای حدود 40 درجه منجمد می شود که یک محیط سفت و محکمی ایجاد می کند که اکثر باکتری ها روی این محیط قادر به رشد و نگه داری هستند. آگار محیط های جامد حدود 2% است.

رشد میکروب ها را روی محیط از روی تشکیل کلنی بررسی می کنند. سپس کلنی ها را از نظر شکل، حاشیه، ارتفاع، رنگ، بو، قوام و ... مورد بررسی قرار می دهند.

 

ج) محیط های نیمه جامد

محیط های مایعی هستند که حدود 2/0 تا 5/0 درصد آگار دارند و برای بررسی حرکت باکتری از این محیط ها استفاده می شود.

 

مراحل تهیه محیط کشت

الف) وزن کردن

در این مرحله از ظروف یا کاغذ توزین استفاده می شود، به اضافه ترازوهایی که دقتشان 1/0 گرم است. در این مرحله قبل از اینکه مادۀ مورد نظر را برداریم باید عمل پارسنگ کردن را انجام دهیم.

پارسنگ کردن: کم کردن وزن ظرف یا کاغذ توزین از مقدار مادۀ مورد نظر به منظور تعیین وزن خالص

 

ب) حل کردن در آب مقطر

چون آب مقطر فاقد املاح است محیط کشت سریعاً در آن حل می شود.

اگر بخواهیم محیط کشت مایع درست کنیم پس از حل کردن در آب مقطر داخل لوله می ریزیم و در لوله را با پنبه می بندیم، بعداً استریل می کنیم اما در مورد محیط های کشت جامد ابتدا می جوشانیم تا شفاف شود، چون آگار در دمای جوش به حالت محلول در می آید سپس آنرا استریل می کنیم.

 

د) استریل کردن با دستگاه اتوکلاو

اتوکلاو: دیگ بخار دو جداره ای هست که قادر هست در فشار بخار 15 تن بر اینچ مربع و دمای 121 درجه به مدت 15 تا 20 دقیقه محیط کشت و یکسری لوازم شیشه ای را استریل کند. این دستگاه با حرارت مرطوب کار می کند و مکانیسم آن تقلیب یا دناتوره کردن پروتئین است.

 

راه های تست کردن اتوکلاو:

الف) قهوه ای و تیره شدن خط روی نوار

 

ب) استفاده از نوارهای آغشته به اسپور نوعی باکتری به نام باسیلوس استئاروترموفیلوس. این باکتری گرما دوست است و معمولاً در دمای 50 درجه سانتی گراد رشد می کند.

طریقه استفاده از نوار آغشته به اسپور: نوار آغشته شده به این باکتری را درون اتوکلاو می گذاریم و بعد از آن نوارها را به داخل یک محیط کشت مایع انتقال می دهیم و محیط کشت را در دستگاه انکوباتور می گذاریم (دمای دستگاه باید 50 درجه سانتی گراد باشد). اگر اسپور در اتوکلاو از بین رفته باشد در داخل محیط مایع و 50 درجه سانتی گراد رشد نمی کند، اما اگر محیط کشت کدر شد اسپور از بین نرفته است و این دلیل بر خراب بودن اتوکلاو است.

 

ج) محیط های کشت را بعد از اتوکلاو کردن در چند پلیت تقسیم می کنیم. به عنوان نمونه یکی دوتا پلیت بدون هیچ کشت درون انکوباتور می گذاریم. اگر روز بعد کلنی روی نمونه تشکیل شد، محیط آلوده به باکتری می باشد.

 

پلیت های یک بار مصرف را معمولاً در کارخانه های سازنده بعد از بسته بندی شدن با اشعه (مثل گاما) استریل می کنند اما پلیت های شیشه ای را با دستگاه فور استریل می کنند.

دستگاه فور: دستگاهی است برای استریل کردن وسایل شیشه ای و فلزی (که حتماً باید دربسته باشند و یا اینکه از فویل و ... استفاده می کنیم تا اینکه وسایل را خوب بپوشانیم). سیستم فور ایجاد حرارت خشک می کند که ما می توانیم دما را از 160 تا 180 درجه در مدت یک تا دو ساعت تنظیم کنیم.


Foot Problems
یکشنبه 15 مرداد 1396 03:09 بعد از ظهر
Having read this I thought it was very enlightening.
I appreciate you finding the time and effort to put this informative article together.
I once again find myself spending a lot of time both reading and commenting.

But so what, it was still worth it!
http://danyellemesiti.weebly.com/blog/why-shoe-lifts-are-the-ideal-solution-to-leg-length-difference
دوشنبه 9 مرداد 1396 07:28 قبل از ظهر
I every time used to study paragraph in news papers but now as I am
a user of net therefore from now I am using net for
articles or reviews, thanks to web.
BHW
پنجشنبه 24 فروردین 1396 09:17 بعد از ظهر
It's a pity you don't have a donate button! I'd definitely donate to this fantastic blog!

I suppose for now i'll settle for book-marking and adding your RSS feed
to my Google account. I look forward to brand new updates and will
share this site with my Facebook group. Chat soon!
ali.A
پنجشنبه 21 آذر 1392 09:38 بعد از ظهر
دمت گرم-----------واسه گزارش کار رشته پرستاری استفاده کردیم
فرزانه
چهارشنبه 6 اردیبهشت 1391 01:39 بعد از ظهر
من هرچی میزن مطلبتون نمیاد
کلافه شدم از دستتون
اه
sani
شنبه 15 آبان 1389 01:16 قبل از ظهر
از شما نهایت سپاس را دارم
sani
شنبه 15 آبان 1389 01:15 قبل از ظهر
گس پیک چیست؟
h.k
جمعه 15 آذر 1387 08:40 بعد از ظهر
سلام
مطلبتون خوب بود
بالاخره چیزی که میخواستم رو پیدا کردم ممنون
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر